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用柞蚕蛹生产外源基因产物的方法
无权-届满

申请号:92103655.8 申请日:1992-05-08
摘要:一种用于基因工程的用柞蚕蛹生产外源基因产物的方法,它组建了柞蚕核型多角体病毒表达载体,利用柞蚕蛹为活体宿主,将外源基因克隆到柞蚕NPV表达载体后,将野生的ApNPV DNA与重组质粒DNA一起转染柞蚕细脆或柞蚕蛹,形成载有外源基因的重组病毒,再将经纯化所得的重组病毒感染柞蚕蛹,即可在柞蚕蛹体内大量表达生产该基因产品。本发明采用柞蚕蛹作为活体宿主资源丰富稳定、可识别基因的信号序列,表达量高于苜蓿尺蠖100倍以上。
申请人: 辽宁省农业科学院大连生物技术研究所
地址: 116023辽宁省大连市甘井子区栾金村
发明(设计)人: 张春发 刘淑珊 范琦 李广泽
主分类号: C12N15/12
分类号: C12N15/12 C12N15/63
  • 法律状态
2012-07-04  专利权有效期届满IPC(主分类):C12N 15/12申请日:19920508授权公告日:19980204期满终止日期:20120508
1998-02-04  授权
1993-11-10  公开
1992-10-28  
注:本法律状态信息仅供参考,即时准确的法律状态信息须到国家知识产权局办理专利登记簿副本。
  • 其他信息
主权项  1、一种用于基因工程的用柞蚕蛹生产外源基因产物的方法,它是将纯化的病毒粒子经抽提得到的APNPV?DNA进行限制性内切酶酶谱分析、琼脂糖凝胶电泳、Southern转印,并用OpNPV核多角体蛋白基因为探针进行分子杂交确定多角体蛋白基因在ApNPV基因组中的位置,其特征在于: a.用大肠杆菌载体质粒(PAT153、Puc19)克隆、增殖所载该基因的DNA片段为5′端的PvuⅡ--BamHI片段和3′端的BamHI--PstI片段,分别以单链DNA和双链DNA为模板采用双脱氧序列分析法对所克隆的DNA片段进行核苷酸序列分析,读出柞蚕NPV核多角体蛋白的基因的全编码序列735bp和其两侧翼区部分非编码序列,采用Primer??Extension方法确定该基因mRNA转录起始点位于nt--50的A位点,进而确定该基因的5′末端基因表达调控序列的位置; b、采用人工合成寡核苷酸引物引导点突变及PCR等技术将ApNPV多角体蛋白基因的起始密码子去掉(ATG突变为ATT)同时分别切掉nt+2~+140、nt+9~+140和nt+37~+140?5′末端编码序列,组建了PAPM740、741、748和736等系列基因转移载体; c、将外源基因分别克隆到所组建的四个载体中,抽提重组质粒DNA,并与抽提的ApNPV?DNA一起转染柞蚕卵巢细脆或柞蚕蛹,待柞蚕细胞或柞蚕蛹感染发病后取其病毒液分别用空斑法或末端稀释法分离外源基因重组病毒; d将分离的重组病毒感染柞蚕蛹,经分离、纯化即可得到外源基因产物。
公开号  1078260
公开日  1993-11-10
专利代理机构  大连市专利服务中心
代理人  郭丽华
颁证日  
优先权  
国际申请  
国际公布  
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