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一种利用基因工程高效表达酰胺化EC07的方法
审中-实审

申请号:201510854487.4 申请日:2015-11-27
摘要:本发明涉及基因工程技术领域,尤其涉及一种利用基因工程高效表达酰胺化EC07的方法。本发明成功利用大肠杆菌高效表达EC07,并进行其C末端酰胺化修饰,能够延长其半衰期,更符合其体内天然酰胺化形式,表达产物稳定性好,易操作和放大,适于规模工业化生产,重组抗菌肽对常见的革兰氏阴性菌抗菌能力强,按不同比例组合抗菌肽EC07与不同抗生素,能发挥协同增效效果,显著降低抗生素用量,具有作为抗生素替代药物的应用潜力。
申请人: 青岛康伦生物科技有限公司
地址: 266000 山东省青岛市崂山区松岭路330号
发明(设计)人: 俞超 周冠 李蕾 邓玮
主分类号: C12N15/70(2006.01)I
分类号: C12N15/70(2006.01)I C12N1/21(2006.01)I C12P21/02(2006.01)I A61K38/16(2006.01)I A61P31/00(2006.01)I A23L33/18(2016.01)I A23K20/147(2016.01)I A61K8/64(2006.01)I C12R1/19(2006.01)N
  • 法律状态
2016-02-24  实质审查的生效IPC(主分类):C12N 15/70申请日:20151127
2016-01-27  公开
注:本法律状态信息仅供参考,即时准确的法律状态信息须到国家知识产权局办理专利登记簿副本。
  • 其他信息
主权项  一种利用大肠杆菌高效表达酰胺化EC07的方法,其特征在于,步骤如下:a)根据大肠杆菌密码子偏好性优化EC07序列;b)利用双酶切构建pSUMO?EC07?Intein重组表达质粒及转化相应的克隆菌株;c)PCR及测序鉴定阳性转化子,亚克隆至大肠杆菌表达菌株;d)挑阳性单克隆表达菌株至摇瓶,诱导表达后收集菌体,超声破碎离心获得融合蛋白;e)利用Ni柱纯化上述融合蛋白后进行切割Intein获得含有SUMO标签的融合蛋白,进一步纯化后进行蛋白酶切割释放目的多肽EC07,过分子筛后获得酰胺化EC07;f)利用LC?MS对酰胺化EC07进行质谱鉴定;g)抗菌肽的杀菌活性检测。
公开号  105274128A
公开日  2016-01-27
专利代理机构  北京中北知识产权代理有限公司 11253
代理人  段秋玲
颁证日  
优先权  
国际申请  
国际公布  
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