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一种重组人表皮生长因子原液生产工艺
审中-实审

申请号:201510843061.9 申请日:2015-11-26
摘要:本发明公开了一种重组人表皮生长因子原液生产工艺,该培养基由以下重量比例成分制成:甘油5.0-7.0%、酵母碱基(YNB)3.0-3.5%、微量金属离子1.8-2.2%、诱导剂1.2-1.8%、生物素0.5-1.0%、促进剂0.5-1.0%、水余量;所述微量金属离子为三氯化铁、氯化钙、钼酸钠、氯化锌、硫酸铜、硼酸、硫酸铝中的一种;用磷酸盐缓冲液调pH为5.5-6.5。本发明使用的植物原料成分经过了蒸汽爆破、蒸馏、高剪切均质机处理,得到纳米乳状的植物油性成分,和培养基中其他配方的相容性好。本发明通过在培养基中添加植物原料成分作为促进剂,和现有技术相比,发酵液的产量会提高31-42%。
申请人: 桂林华诺威基因药业有限公司
地址: 541004 广西壮族自治区桂林市高新区骖鸾路36号
发明(设计)人: 韦忠明 黄启斌 莫冬海 马冲 包能创 唐申秀
主分类号: C12P21/02(2006.01)I
分类号: C12P21/02(2006.01)I C07K14/485(2006.01)I C07K1/20(2006.01)I C07K1/16(2006.01)I
  • 法律状态
2016-02-24  实质审查的生效IPC(主分类):C12P 21/02申请日:20151126
2016-01-27  公开
注:本法律状态信息仅供参考,即时准确的法律状态信息须到国家知识产权局办理专利登记簿副本。
  • 其他信息
主权项  一种重组人表皮生长因子原液生产工艺,其特征在于,包括以下步骤:1)培养基的准备:由以下重量比例成分制成:所述微量金属离子为三氯化铁、氯化钙、钼酸钠、氯化锌、硫酸铜、硼酸、硫酸铝中的一种;用磷酸盐缓冲液调pH为5.5?6.5;所述促进剂采用以下方法制备:①原料处理:将穿心莲和金银花按照等重混合、洗净、干制、粉碎;②蒸汽爆破处理:将步骤①得到的物料放入蒸汽爆破罐,爆破压力3.0?3.5Mpa,保压时间维持在150?200s;③蒸馏处理:将步骤②得到的物料放入蒸馏器,在蒸馏器底部,加热燃烧或通入蒸汽,当炙热的蒸气充满在蒸馏器里,水蒸气通过冷凝管,被引入冷凝器内,再通过油水分离器,收集精油;④高剪切均质机处理:将步骤③得到的精油通过高剪切均质机处理,线速度30?40m/s,时间3?5min,制成纳米乳,并用微孔滤膜过滤除菌得到;2)发酵、表达:应用2L摇瓶及20L原位灭菌发酵罐培养遗传工程菌株,以1O%培养基接种后,添加诱导剂,30℃培养,控制pH7.0,氧饱和度10?50%,搅拌150?170rpm,罐压0.01378?0.03445MPa,流加甘油至每L湿菌达100?300g后流加甲醇保持其浓度为1%以进行EGF的诱导表达;3)分离:表达结束,离心分离,既得重组克隆菌株离心液;4)纯化:将步骤3)得到的重组克隆菌株离心液,加入硫酸铵使浓度成0.5M,上样于用5倍柱体积量的20mM磷酸缓冲液pH7.0,0.5M硫酸胺溶液平衡过的疏水柱,以20mM磷酸缓冲液pH7.0,0.5M硫酸胺将进样峰洗至基线,以20mM磷酸缓冲液洗脱出EGF峰,该样品峰以20mM?Tris?HCl?pH7.6缓冲液稀释10倍后上样于Q?sepharose?High?Performance柱,以A液(20mM?Tris?HCl?pH7.6)至B液(20mM?Tris?HC1pH7.6,0.5MNaCl)梯度洗脱方法收集EGF峰,最后用分子筛Superdex?30柱纯化重组hEGF蛋白,纯度可达98%以上。
公开号  105274173A
公开日  2016-01-27
专利代理机构  桂林市持衡专利商标事务所有限公司 45107
代理人  汤凌志
颁证日  
优先权  
国际申请  
国际公布  
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