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一种用于同时检测线粒体DNA 4401A>G和4435A>G突变的试剂盒及其检测方法
审中-实审

申请号:201510808820.8 申请日:2015-11-20
摘要:一种用于同时检测线粒体DNA?4401A>G和4435A>G突变的试剂盒及其检测方法,所述方法包括DNA的提取、特异性引物设计、特异性条带PCR扩增、两种限制性内切酶Blaf和NlaIII酶切、琼脂糖凝胶电泳鉴定,本发明实现了10小时内出结果,且一种酶只能识别一种特定的脱氧核苷酸序列,结果准确,本发明还提供检测线粒体DNA?4435A>G和4401A>G突变检测试剂盒,检测所需仪器要求低、所需试剂成本小、所需操作简单易掌握、所用方法稳定,特异性好等优点,适合大范围推广。
申请人: 温州迈拓生物科技有限公司
地址: 325000 浙江省温州市瓯海经济开发区东方南路38号
发明(设计)人: 薛凌 唐霄雯 于涵
主分类号: C12Q1/68(2006.01)I
分类号: C12Q1/68(2006.01)I
  • 法律状态
2016-02-24  实质审查的生效IPC(主分类):C12Q 1/68申请日:20151120
2016-01-27  公开
注:本法律状态信息仅供参考,即时准确的法律状态信息须到国家知识产权局办理专利登记簿副本。
  • 其他信息
主权项  一种用于同时检测线粒体DNA?4401A>G和4435A>G突变的方法,其特征在于,所述的方法包括以下步骤:(1)提取全基因组DNA:运用蛋白酶K消化裂解蛋白质,酚?氯仿?异戊醇法,提取全基因组DNA;(2)特异性PCR扩增:根据人类线粒体基因剑桥参考序列,线粒体引物6F、6R作为巢式PCR的第一对引物,特异性扩增mtDNA?3796?4654位,全长898bp,产物进行纯化后,接着以纯化后产物为模板,采用线粒体小引物Mt?Hp?F、Mt?Hp?R作为巢式PCR的第二对引物,特异性扩增mtDNA?4344?4577位,全长234bp;(3)采用限制性内切酶Blaf的特异性识别序列为CTAG回文结构,限制性内切酶NlaIII的特异性识别序列为CATG回文结构的特点,然后根据上述的特异性条带对扩增的DNA进行酶切;(4)电泳鉴定:酶切后产物进行琼脂糖凝胶电泳,根据酶切产物DNA片段数量及大小即可鉴定线粒体DNA是否发生4401A>G或4435A>G突变。
公开号  105274240A
公开日  2016-01-27
专利代理机构  温州金瓯专利事务所(普通合伙) 33237
代理人  黄肇平
颁证日  
优先权  
国际申请  
国际公布  
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