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一种用细胞系生产鸡传染性喉气管炎活疫苗的方法
审中-实审

申请号:201510788499.1 申请日:2015-11-16
摘要:一种用细胞系生产鸡传染性喉气管炎活疫苗的方法,选用细胞系代替鸡胚进行鸡传染性喉气管炎病毒液的增殖,经培养细胞系、克隆纯化、传代、培养、病毒株的克隆、培养、疫苗配制、收获制苗毒液、分装、冻干等工序制成。本发明用传代细胞生产鸡传染性喉气管炎活疫苗,降低了生产成本,减少了疫苗免疫副反应问题,缩小了批间差异性,保证了疫苗质量的稳定,并为实现所述病毒的规模化培养奠定了基础。实验表明,本发明克隆方法仅通过3次克隆便可获得无细胞内杂质、透亮、圆润、轮廓清晰的细胞,而现有方法需要克隆7次,可见本方法缩短了克隆时长,并在克隆中具有高活性及高几率的克隆几率。
申请人: 河北远征药业有限公司
地址: 050041 河北省石家庄市长安区柳源路16号
发明(设计)人: 毛雅园 魏丽娟 刘毅 郭鸿志 杨国辉 王德功 周岩 谢艳芳 孔瑞岗 魏占勇 刘欣
主分类号: A61K39/255(2006.01)I
分类号: A61K39/255(2006.01)I C12N7/00(2006.01)I A61P31/22(2006.01)I
  • 法律状态
2016-04-06  实质审查的生效IPC(主分类):A61K 39/255申请日:20151116
2016-01-27  公开
注:本法律状态信息仅供参考,即时准确的法律状态信息须到国家知识产权局办理专利登记簿副本。
  • 其他信息
主权项  一种用细胞系生产鸡传染性喉气管炎活疫苗的方法,其特征在于,其选用细胞系代替鸡胚进行鸡传染性喉气管炎病毒液的增殖,步骤如下:(1)筛选鸡传染性喉气管炎病毒培养细胞系:根据鸡传染性喉气管炎病毒生物学特性,选取BHK?21细胞、Vero细胞、DF1细胞、原代鸡胚成纤维细胞(CEF)、鸡胚肝细胞、鸡胚肾细胞,前两种细胞采用DMEM培养液进行培养,后四种细胞使用M199培养液,分别进行所述病毒的培养,得病毒株适应性细胞;(2)筛选细胞的克隆纯化:对步骤(1)中所得的病毒株适应性细胞用8%胎牛血清培养液进行稀释,稀释浓度为2个细胞/ml,加入48孔细胞板中,0.3ml/孔进行细胞克隆培养,选取细胞生长均一、轮廓清晰、透亮,细胞内无杂质的细胞孔进行消化冻存备用;(3)制苗细胞的传代、培养:(4)病毒株的克隆、培养:采用步骤(2)中的克隆细胞进行病毒株的蚀斑克隆培养,共克隆四次,一次克隆分别选取三个最小蚀斑,分别进行后三次的克隆,最终分别繁殖克隆三个毒株,筛选出毒力最弱、免疫原性最强的制苗毒株,并对所述毒株进行适应性培养;(5)制苗用毒液的制备:用M199培养液对步骤(4)制苗毒株进行稀释,接种于长满单层的制苗细胞中,于培养箱中吸附,待吸附后弃去稀释液,补加细胞维持液,进行病毒的培养,最终收获细胞悬液备用;(6)疫苗的配制及分装:收获步骤(5)中的制苗毒液,加入保护剂,充分混匀,定量分装;(7)冻干。
公开号  105267961A
公开日  2016-01-27
专利代理机构  石家庄冀科专利商标事务所有限公司 13108
代理人  陈月霞 李羡民
颁证日  
优先权  
国际申请  
国际公布  
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