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一种不同聚合度κ-卡拉胶寡糖的制备方法
审中-实审

申请号:201510595819.1 申请日:2015-09-18
摘要:本发明公开了一种不同聚合度κ-卡拉胶寡糖的制备方法,即先培养胞外能产κ-卡拉胶酶的卡拉胶降解菌,离心得粗酶液,再将粗酶液作用于卡拉胶,通过调节底物浓度、反应温度、pH和振荡速率得到不同聚合度的卡拉胶寡糖混合物。本发明通过测定各条件不同反应时间下的平均聚合度,得到了聚合度范围较广的卡拉胶寡糖,制备方法简单快速,反应条件温和,相对于物理化学方法反应过程易于控制,便于生产应用。
申请人: 集美大学 绿新(福建)食品有限公司
地址: 361000 福建省厦门市集美区银江路185号
发明(设计)人: 郭东旭 洪清林 林坤城 肖安风 蔡慧农 倪辉
主分类号: C12P19/14(2006.01)I
分类号: C12P19/14(2006.01)I C12P19/04(2006.01)I
  • 法律状态
2016-02-24  实质审查的生效IPC(主分类):C12P 19/14申请日:20150918
2016-01-27  公开
注:本法律状态信息仅供参考,即时准确的法律状态信息须到国家知识产权局办理专利登记簿副本。
  • 其他信息
主权项  一种不同聚合度κ?卡拉胶寡糖的制备方法,其特征在于:主要包括以下步骤:步骤1:培养基的制备人工海水:NaCl?28.13g,KCl?0.77g,CaCl2·2H2O?1.60g,MgCl·6H2O?4.80g,NaHCO3?0.11g,MgSO4·7H2O?3.50g,蒸馏水1000mL;活化培养基:牛肉膏10g,蛋白胨10g,蒸馏水250mL,人工海水750mL;牛肉膏、蛋白胨溶解于蒸馏水后后调pH?7.8,煮沸后调pH?7.3,与人工海水混匀后,121℃,灭菌20min;发酵培养基:NaCl?20g,CaCl2?0.20g,蛋白胨5.0g,NaH2PO4·2H2O?1.3g,Na2HPO4·12H2O?3.82g,卡拉胶5g,蒸馏水1000mL,pH自然,121℃,灭菌20min;步骤2:将菌种Pseudoalteromonas?carrageenovora?ASY5,该菌种来源于中国工业微生物菌种保藏管理中心(CICC),保藏编号:CICC?23819,先接种于活化培养基中,于18?22℃、180rpm摇床上培养24?26h,进行培养活化;按2?3%的接种量将菌液接种到发酵培养基中,于18?22℃、180rpm摇床培养36?40h;将发酵液在4℃条件下,7000?9000rpm冷冻离心15min,取上清液,即得粗酶液;步骤3:将酶活为2.5?3.0U/mL的粗酶液按10%的量加入到卡拉胶溶液中,混匀,进行酶解反应;步骤4:改变底物卡拉胶浓度进行酶解反应:在所述步骤3中,以浓度为0.05mol/L、pH?7.0的磷酸盐缓冲液,溶解卡拉胶,改变底物卡拉胶浓度,于45℃条件下进行酶解反应,制得聚合度范围为8?15的卡拉胶寡糖;步骤5:改变溶液pH进行酶解反应:在所述步骤3中,以浓度为0.05mol/L、不同pH的磷酸盐缓冲液,溶解卡拉胶,于45℃进行酶解反应,制得聚合度范围为7?45的卡拉胶寡糖;步骤6:改变反应温度进行酶解反应:在所述步骤3中,以浓度为0.05mol/L、pH为9.0的磷酸盐缓冲液配置成浓度为12g/L的卡拉胶溶液,于不同温度下进行酶解反应,制得聚合度范围为7?14的卡拉胶寡糖;步骤7:改变振荡速率进行酶解反应:在所述步骤3中,以浓度为0.05mol/L、pH为9.0的缓冲液配置成浓度为12g/L的卡拉胶溶液,于40℃,不同振荡速率条件下进行酶解反应,制得聚合度范围为6?8的卡拉胶寡糖;步骤8:将步骤4至步骤7酶解反应后的反应液,分别加入无水乙醇于4℃冰箱放置过夜,离心,收集沉淀真空冷冻干燥,即分别制得不同聚合度的κ?卡拉胶粗寡糖。
公开号  105274162A
公开日  2016-01-27
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