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复制型重组人55型腺病毒载体及其制备方法和应用
审中-实审

申请号:201410293359.2 申请日:2014-06-25
摘要:本发明公开了一种复制型重组人55型腺病毒载体及其制备方法和应用。所述复制型重组人55型腺病毒载体是以同源重组技术将人55型腺病毒基因组环化,以同源重组及双抗性筛选技术敲除Ad55的E3基因,且可以整合入外源基因表达框,将E3基因缺失的Ad55载体质粒线性化后,转染哺乳动物细胞可成功拯救并大量生产,进一步经密度梯度离心得到纯化的重组Ad55载体,以该载体携带外源基因可在靶细胞内实现高效表达,且外源报告基因的活性可反映病毒的生长特性。本发明基于人Ad55的复制型载体可潜在地应用于:抗人55型腺病毒疫苗研发;抗人55型腺病毒药物及中和抗体筛选;抗其他病原体疫苗的研发;生物学研究的报告示踪系统等。
申请人: 中国科学院广州生物医药与健康研究院
地址: 510663 广东省广州市广州科学城开源大道190号
发明(设计)人: 陈凌 冯立强 孙彩军 秦成峰
主分类号: C12N15/861(2006.01)I
分类号: C12N15/861(2006.01)I C12N15/66(2006.01)I A61K48/00(2006.01)I A61K39/235(2006.01)I A61P31/20(2006.01)I C07K16/08(2006.01)I
  • 法律状态
2016-02-24  实质审查的生效IPC(主分类):C12N 15/861申请日:20140625
2016-01-27  公开
注:本法律状态信息仅供参考,即时准确的法律状态信息须到国家知识产权局办理专利登记簿副本。
  • 其他信息
主权项  一种复制型重组人55型腺病毒载体的制备方法,其特征在于:包括以下步骤:(1)以Ad55基因组为模板,分别扩增基因组两端反向重复序列作为同源重组臂L和R,并连接至氨苄抗性载体,线性化后与人55型腺病毒基因组在大肠杆菌中同源重组,得到环化的基因组质粒A;(2)以Ad55基因组为模板,扩增E3基因两端序列并反向连接至卡那抗性载体,线性化后与线性化的步骤(1)所述基因组质粒A重组,再经氨苄/卡那双抗筛选,得到去除E3基因的基因组质粒B;(3)构建敲除Kana基因的穿梭质粒,与线性化的步骤(2)所述基因组质粒B同源重组,得到去除Kana基因的pAd55ΔE3质粒,并整合入唯一酶切位点,线性化后转染哺乳动物细胞,密度梯度离心得到纯化的复制型重组人55型腺病毒载体。
公开号  105274142A
公开日  2016-01-27
专利代理机构  广州华进联合专利商标代理有限公司 44224
代理人  万志香
颁证日  
优先权  
国际申请  
国际公布  
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