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铁皮石斛的茎尖组培繁殖方法
无权-视为撤回

申请号:201310282962.6 申请日:2013-07-08
摘要:铁皮石斛的茎尖组培繁殖方法,属于中药材种植技术领域,包括引种灭菌、诱导培养、增殖培养、分化培养、壮苗和生根培养五大步骤;其有益效果是采用茎尖组培所得到的幼苗,其遗传性状稳定,有效物质含量与野生品种相近;同时本发明方法还大大缩短了铁皮石斛的组培繁殖周期,从剪切茎尖到生根苗的组培周期仅需5个月左右,大大缩短了生产时间,降低了生产成本。
申请人: 重庆市秀山红星中药材开发有限公司
地址: 409900 重庆市秀山土家族苗族自治县秀山县乌杨街道园区路21号
发明(设计)人: 杨再江 刘湘凤 顾君 龚成珍 祝利
主分类号: A01H4/00(2006.01)I
分类号: A01H4/00(2006.01)I
  • 法律状态
2017-03-08  发明专利申请公布后的视为撤回 IPC(主分类):A01H 4/00申请公布日:20130925
2013-09-25  公开
注:本法律状态信息仅供参考,即时准确的法律状态信息须到国家知识产权局办理专利登记簿副本。
  • 其他信息
主权项  铁皮石斛的茎尖组培繁殖方法,包括引种灭菌、诱导培养、增殖培养、分化培养、壮苗和生根培养五大步骤,其特征在于具体方法如下;⑴引种灭菌:选取健壮的野生铁皮石斛苗,从茎尖上切下长2.5~3.5cm的幼嫩茎尖,在流水下冲洗,放入1%洗洁精水溶液中浸泡5 分钟,然后用刷子轻轻刷洗,并用无菌水充分洗净;在超净工作台上将茎尖放置在75%的酒精中消毒30s后,再用0.1%的HgCl2水溶液浸泡7~9min,然后用无菌水冲洗5~6次;⑵诱导培养:将消毒处理后的幼嫩茎尖作为外植体接种在诱导培养基上,每瓶接种3~5株茎尖,在夜温22℃,日温24℃,相对湿度68%~70%,光照强度3000lx,每天光照开始时间上午7:00,每天光照时长12小时的条件下进行圆球茎诱导培养,15~20天后,外植体开始萌动,茎尖膨大,切面及顶部组织形成疏松组织;继续培养15天后,转入到促形培养基中,每瓶培养2~4株茎尖,在夜温23℃,日温25℃,相对湿度70%~72%,光照强度3000lx,每天光照开始时间上午7:00,每天光照时长14小时的条件下进行圆球茎促形培养,25~30天后,切面及顶部膨大组织的表面逐渐形成凹凸不平的颗粒物,随着培养时间的延长,颗粒物长大形成直径1~2mm的圆球茎颗粒物;⑶增殖培养:将诱导产生的生长状态良好的圆球茎转入到增殖培养基中,每瓶接种2~3颗,在夜温24℃,日温26℃,相对湿度70%~72%,光照强度2000lx,每天光照开始时间上午7:00,每天光照时长14小时的条件下进行圆球茎增殖培养,在15~20天之内可观察到增殖培养基中又有新的疏松组织产生,在35~40天之内,可观察到圆球茎增殖了2~3倍;⑷分化培养:将增殖产生的生长状态良好的圆球茎转接到分化培养基上,每瓶接种2~3颗,在夜温25℃,日温27℃,相对湿度72%~75%,光照强度3000lx,每天光照开始时间上午7:00,每天光照时长12小时的条件下进行分化培养,在20~25天之内可观察到圆球茎开始分化出芽点,然后将温度调整为夜温26℃,日温28℃,在第35~40天之内,可观察到圆球茎长出小芽并开始分叶,到第50天可看到增殖芽长高1‑1.5cm并带有2~3片小叶,得到分化苗;⑸壮苗及生根培养:将分化培养后的株高1~2cm、带有2~3片叶的小芽切下转入生根培养基上,每瓶接种3~5株,在夜温26℃,日温28℃,相对湿度72%~75%,光照强度2000lx,每天光照开始时间上午7:00,每天光照时长12小时的条件下进行生根培养,在第20~25天之内,基部开始出现2~3条约1cm长的白色根,每株苗有3~5条根,随后逐渐伸长,到在第35~40天之内,生根率达到90%以上,根须长度1.5cm~2.0cm,苗高3~5cm,即得到铁皮石斛的生根苗,这时可进行炼苗,移栽;上述组培繁殖方法中,所提到的各阶段培养基的配方是:诱导培养基:MS+6‑BA0.5mg/L+NAA0.05mg/L+20 g/L香蕉+30 g/L +活性炭0.2g/L;pH5.8;促形培养基:MS+6‑BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L+20 g/L香蕉+30 g/L +活性炭0.2g/L;pH5.8;增殖培养基:DM+土豆40g/L+琼脂5g/L;pH5.8;分化培养基:DM+BA0.2‑0.8香蕉25g/L+琼脂5g/L+糖20 g/L;pH5.8;生根培养基:DM+BA0.5PPM+香蕉35g/L+琼脂5g/L+糖20 g/L;pH5.6。
公开号  103314859A
公开日  2013-09-25
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