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重组热带剥爪螨变应原Blo t 5蛋白及其制备方法与用途
无权-驳回

Recombinant blomia tropicalis allergen Blot 5 protein, preparation method, and applications thereof

申请号:201210157336.X 申请日:2012-05-17
摘要:本发明涉及生物技术领域,涉及一种重组热带剥爪螨变应原Blo?t5蛋白及其制备方法和用途。本发明从培养的热带剥爪螨提取RNA,通过PCR获得热带剥爪螨变应原Blo?t5蛋白的编码基因后,构建变应原Blo?t5蛋白的表达载体pET19b-Blo?t5。经大量的表达纯化及进一步的鉴定,证实本发明的重组热带剥爪螨变应原Blo?t5蛋白可以与热带剥爪螨过敏患者的血清中IgE和IgG抗体特异性结合,具有与天然热带剥爪螨变应原Blo?t5蛋白相同免疫活性。本发明的制备方法,可获得具有生物学活性的可溶性重组热带剥爪螨变应原Blo?t5蛋白,可用于热带剥爪螨引起的过敏性疾病的诊断和治疗,能避免天然提取物的非单一性及标准化难的障碍。
Abstract: The invention relates to the field of biological technology, and relates to a recombinant blomia tropicalis allergen Blot 5 protein, a preparation method and applications thereof. The preparation method comprises following steps: extracting RNA from the cultured blomia, obtaining the coding gene of blomia tropicalis allergen Blot 5 protein through PCR, and constructing the expression vector pET19b-Blot 5 of blomia tropicalis allergen Blot 5 protein. Through a large amount of expressions and purifications and further verifications, it has been proved that recombinant blomia tropicalis allergen Blot 5 protein can specifically bind to IgE and IgG antibodies in the serum of the blomia tropicalis allergy patients and has the same immunity activity as that of natural blomia tropicalis allergen Blot 5 protein. The preparation method can obtain a soluble recombinant blomia tropicalis allergen Blot 5 protein with biological activity, can be used for diagnosis and treatment of allergic diseases caused by blomia tropicalis, and overcomes the problems of non-uniformity of natural extract and difficult standardization.
申请人: 复旦大学
Applicant: UNIV FUDAN
地址: 200433 上海市杨浦区邯郸路********(隐藏)
发明(设计)人: 蔡俊龙 杨彬 付永锋 程训佳
Inventor: CAI JUNLONG; YANG BIN; FU YONGFENG; CHENG XUNJIA
主分类号: C07K14/435(2006.01)I
分类号: C07K14/435(2006.01)I C12N15/12(2006.01)I C12N15/70(2006.01)I G01N33/68(2006.01)I A61K39/35(2006.01)I A61P33/14(2006.01)I
  • 法律状态
2016-04-13  发明专利申请公布后的驳回IPC(主分类):C07K 14/435申请公布日:20131204
2014-02-19  实质审查的生效IPC(主分类):C07K 14/435申请日:20120517
2013-12-04  公开
注:本法律状态信息仅供参考,即时准确的法律状态信息须到国家知识产权局办理专利登记簿副本。
  • 其他信息
主权项  重组热带剥爪螨变应原Blo?t5蛋白,其特征在于,该重组蛋白为由序列SEQ?ID?No:1的核苷酸序列编码的蛋白;通过下述方法制得:(1)从克隆化培养的热带剥爪螨菌体中分离总RNA,通过RT?PCR合成cDNA;(2)合成引物:Blo?t5?S5?CCCATATGAAGAAGGATGATTTCCGAA?3Blo?t5?as5?CCCTCGAGTTATTGGGTTTGAATATC?3(3)以cDNA为模板,通过PCR获得热带剥爪螨变应原Blo?t5编码基因片段;(4)将编码基因克隆入原核表达载体中,转化宿主菌,培养所得重组工程菌,然后诱导其表达目的蛋白;(5)采用Ni2+亲和层析将重组热带剥爪螨变应原Blo?t5提纯,获得纯化的重组热带剥爪螨变应原Blo?t5。
公开号  103421106A
公开日  2013-12-04
专利代理机构  上海元一成知识产权代理事务所(普通合伙) 31268
代理人  吴桂琴
颁证日  
优先权  
 
国别 优先权号 优先权日 类型
CN  201210157336  20120517 
国际申请  
国际公布  
进入国家日期  
  • 专利对比文献
类型 阶段 文献号 公开日期 涉及权利要求项 相关页数
SEA  CN101443034A  20090527  1-11  权利要求1、10,说明书第4页第3段,实施例15,SEQ ID NO:20-21 
注:不保证该信息的有效性、完整性、准确性,以上信息也不具有任何效力,仅供参考。使用前请另行委托专业机构进一步查核,使用该信息的一切后果由用户自行负责。
X:单独影响权利要求的新颖性或创造性的文件;
Y:与检索报告中其他 Y类文件组合后影响权利要求的创造性的文件;
A:背景技术文件,即反映权利要求的部分技术特征或者有关的现有技术的文件;
R:任何单位或个人在申请日向专利局提交的、属于同样的发明创造的专利或专利申请文件;
P:中间文件,其公开日在申请的申请日与所要求的优先权日之间的文件,或会导致需核实该申请优先权的文件;
E:单独影响权利要求新颖性的抵触申请文件。
  • 期刊对比文献
类型 阶段 期刊文摘名称 作者 标题 涉及权利要求项 相关页数
SEA  《J ALLERGY CLIN IMMUNOL》200707311201  Yun Feng Gao,BEng et al.  Identification and characterization of a novel allergen from Blomia tropicalis:Blo t21  1-11  第105-112页 
YUN FENG GAO,BENG ET AL.: "Identification and characterization of a novel allergen from Blomia tropicalis:Blo t21", 《J ALLERGY CLIN IMMUNOL》, vol. 120, no. 1, 31 July 2007 (2007-07-31), pages 105 - 112 
SEA  《AMERICAN JOURNAL OF RESPIRATORY AND CRITICAL CARE MEDICINE》199701311551  Arruda, LK et al.  Sensitization to Blomia tropicalis in patients with asthma and identification of allergen Blo t 5  1-11  第343-350页 
ARRUDA, LK ET AL.: "Sensitization to Blomia tropicalis in patients with asthma and identification of allergen Blo t 5", 《AMERICAN JOURNAL OF RESPIRATORY AND CRITICAL CARE MEDICINE》, vol. 155, no. 1, 31 January 1997 (1997-01-31), pages 343 - 350 
SEA  《中国病原生物学杂志》20091230412  冯萌等  螨性过敏性疾病的免疫治疗研究进展  1-11  第949-951页 
冯萌等: "螨性过敏性疾病的免疫治疗研究进展", 《中国病原生物学杂志》, vol. 4, no. 12, 30 December 2009 (2009-12-30), pages 949 - 951 
SEA  《GENBANK》20080702  Chan,S.L. et al.  “Chain A, Nmr Structure And Epitope Mapping Of Blo T 5”, GENBANK NO: 2JRK_A, GI:193506481  1-9   
CHAN,S.L. ET AL.: "“Chain A, Nmr Structure And Epitope Mapping Of Blo T 5”, GENBANK NO: 2JRK_A, GI:193506481", 《GENBANK》, 2 July 2008 (2008-07-02) 
SEA  《GENBANK》20080702  Chan,S.L. et al.  “Chain A, Nmr Structure And Epitope Mapping Of Blo T 5”, GENBANK NO: 2JRK_A, GI:193506481  1-9   
CHAN,S.L. ET AL.: "“Chain A, Nmr Structure And Epitope Mapping Of Blo T 5”, GENBANK NO: 2JRK_A, GI:193506481", 《GENBANK》, 2 July 2008 (2008-07-02) 
SEA  《JOURNAL OF IMMUNOLOGY》200808151814  Chan, SL et al.  Nuclear magnetic resonance structure and IgE epitopes of Blo t 5, a major dust mite allergen  10-11  摘要,第2586页左栏第2段至第2587页左栏第1段,第2587页右栏第5段至第2589页左栏第1段,第2592页右栏第3段至第2595页右栏第1段,图2 
CHAN, SL ET AL.: "Nuclear magnetic resonance structure and IgE epitopes of Blo t 5, a major dust mite allergen", 《JOURNAL OF IMMUNOLOGY》, vol. 181, no. 4, 15 August 2008 (2008-08-15) 
  • 书籍对比文献
类型 阶段 书名 作者 标题 涉及权利要求项 相关页数
  • 附加信息
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CN101443034A
 
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