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利用重组大肠杆菌联产琥珀酸和聚Β羟基丁酸酯的方法
无权-未缴年费

Method for coproducing succinic acid and poly beta-hydroxybutyrate using recombination of escherichia coli

申请号:200810138886.0 申请日:2008-08-08
摘要:本发明首次公开了一种利用大肠杆菌联产琥珀酸和PHB的方法,是敲除了大肠肝菌中的SDHAB和ICLR基因,构建了琥珀酸好氧发酵途径,获得了琥珀酸发酵工程菌株MG1655ΔSDHAB ΔICLR::KAN;在此基础上,将PHB合成途径导入大肠杆菌MG1655ΔSDHAB ΔICLR::KAN中,从而在同一大肠杆菌中成功构建了琥珀酸和PHB发酵途径。发酵检测结果表明,该工程菌株可高效率地转化葡萄糖生成琥珀酸和PHB。消耗75G/L的葡萄糖,生成37.5G/L的琥珀酸,同时菌体积累PHB达到菌体干重的28%。该工程菌株具有重要的应用前景。
Abstract: The invention discloses a method for co-producing butanedioic acid and PHB by utilizing colon bacillus for the first time, which is used for knocking out sdhAB and iclR genes in the colon bacillus, and for constructing aerobic fermentation way of the butanedioic acid, so that butanedioic acid fermentation technology bacterial strains MG1655 delta sdhAB delta iclR::kan; on that basis, a PHB biosynthetic pathway is educed into colon bacillus MG1655 delta sdhAB delta iclR::kan, thereby successfully constructing the butanedioic acid and PHB fermentation way in the same colon bacillus. The fermentation and test results prove that the engineering bacterial strain can effectively transform glucose to generate the butanedioic acid and the PHB. 75g/L of glucose is consumed, and 37.5g/L of butanedioic acid is generated; at the same time, PHB is accumulated by thalli to be weighed as 28% of the dry weight of the thalli. The engineering bacterial strain has important application prospect.
申请人: 山东大学
Applicant: UNIV SHANDONG[CN]
地址: 250100山东省********(隐藏)
发明(设计)人: 祁庆生 康振
Inventor: QINGSHENG QI[CN]; ZHEN KANG[CN]
主分类号: C12P7/46(2006.01)I
分类号: C12P7/46(2006.01)I C12P7/62(2006.01)I C12N15/52(2006.01)I C12N15/63(2006.01)I C12N1/21(2006.01)I C12R1/19(2006.01)N
  • 法律状态
2016-09-28  未缴年费专利权终止 IPC(主分类):C12P 7/46申请日:20080808授权公告日:20110330终止日期:20150808
2011-03-30  授权
2009-04-08  实质审查的生效
2009-02-11  公开
注:本法律状态信息仅供参考,即时准确的法律状态信息须到国家知识产权局办理专利登记簿副本。
  • 其他信息
主权项  1.一种利用大肠杆菌联产琥珀酸和聚β羟基丁酸酯的方法,步骤包括 (1)在大肠杆菌中构建琥珀酸好氧发酵途径; (2)在所构建琥珀酸好氧发酵途径的大肠杆菌中构建PHB发酵途径;获得联产琥珀酸 和PHB的重组大肠杆菌;或者: (1)在大肠杆菌中构建PHB发酵途径; (2)在所构建PHB发酵途径的大肠杆菌中构建琥珀酸好氧发酵途径;获得联产琥珀酸 和PHB的重组大肠杆菌; (3)发酵联产琥珀酸和PHB的重组大肠杆菌并检测琥珀酸和PHB; 其特征是:步骤(1)所述在大肠杆菌中构建琥珀酸好氧发酵途径是通过Red重组系 统在大肠杆菌MG1655、JM109、DH5α、Xl1-blue或W3110中敲除基因sdhAB和iclR, 构建琥珀酸好氧发酵途径;步骤(2)所述在所构建琥珀酸好氧发酵途径的大肠杆菌中构建 PHB发酵途径是将来源于真养产碱杆菌(Alcaligenes?eutrophus)、肥大产碱杆菌 (Alcaligenes.latus)、自养黄杆菌(Xanthobacter?autotrophicus)、巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)或恶臭假单胞菌(Pseudomonas?putida)的PHB合成酶基因phbCAB克隆至质 粒pBluescript?SK-、pUC18、pUC19、pCL1920或pTrc99-A中,并转化到已构建有琥珀 酸好氧发酵途径的大肠杆菌中,获得联产琥珀酸和PHB的重组大肠杆菌;或者步骤(1) 所述在大肠杆菌中构建PHB发酵途径是将来源于真养产碱杆菌(Alcaligenes?eutrophus)、 肥大产碱杆菌(Alcaligenes?latus)、自养黄杆菌(Xanthobacter?autotrophicus)、巨大芽孢杆 菌(Bacillus?megaterium)或恶臭假单胞菌(Pseudomonas?putida)的PHB合成酶基因phbCAB 克隆至质粒pBluescript?SK-、pUC18、pUC19、pCL1920或pTrc99-A中,获得PHB表 达重组质粒并转化大肠杆菌MG1655、JM109、DH5α、Xl1-blue或W3110,得PHB发 酵途径的大肠杆菌;步骤(2)所述在所构建PHB发酵途径的大肠杆菌中构建琥珀酸好氧 发酵途径是将sdhAB和iclR基因敲除,获得联产PHB和琥珀酸的重组大肠杆菌;步骤 (3)所述联产琥珀酸和PHB的重组大肠杆菌的发酵条件是:摇瓶:温度设为30~40℃, 摇床转速设为150~300转/分,发酵时间48h~72h;发酵罐:温度设为30~40℃,溶氧 控制在50%以上,pH6.5~7.5,发酵时间72h~150h。
公开号  101363032A
公开日  2009-02-11
专利代理机构  济南金迪知识产权代理有限公司
代理人  王绪银
颁证日  
优先权  
 
国别 优先权号 优先权日 类型
CN  200810138886  20080808 
国际申请  
国际公布  
进入国家日期  
  • 专利对比文献
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  • 书籍对比文献
类型 阶段 书名 作者 标题 涉及权利要求项 相关页数
  • 附加信息
同族专利
CN101363032B
 
引用文献
 
被引用文献
WO2016065709A1CN102154387ACN102827800A